HIV定量检测(病毒载量)

2020-10-22 来源:网易新闻   关键字:防艾 艾滋

HIV定量检测(病毒载量)

  原标题:HIV定量检测(病毒载量)

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  一、HIV载量

  人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus, HIV)属于单股正链核糖核酸(RNA)逆转录病毒科慢病毒亚科,是艾滋病的主要病原体,主要传播途径为性传播、血液传播和母婴传播。至今,艾滋病仍然是无有效疗法的致命性传染病。HIV基因组是两条相同的正链RNA,每条RNA长约9.2-9.8kb。HIV载量是指血浆中的病毒负荷,即体内复制的病毒的数量,它可以准确地反映血液中病毒的活跃程度。

  二、病毒载量检测的重要性

  在艾滋病的预防过程中,艾滋病高危人群的诊断是“防艾”的关键环节。血清中HIV RNA是病毒复制和艾滋病进程的确切标志。所以血清中HIV RNA的检测已经成为诊断艾滋病的金标准方法,也是通过国家认证的临床PCR实验室常规检测项目之一,在艾滋病确诊、用药、疗效预判以及康复治疗过程中具有重要的指导意义。

  检测HIV-1病毒载量可以监控和预测病程,指导艾滋病病人的HAART治疗,包括确定治疗时机、选择治疗方案、评价治疗效果;并且结合疾病临床症状和其他实验指标,还可用于早期感染的辅助诊断。另外,检测血浆HIV-1病毒载量还可作为婴儿早期HIV感染的辅助诊断以及采供血机构样品的窗口期检测方法。具体来说包括:

  ⑴ 监测抗病毒药物治疗效果。抗病毒药物治疗前后,定期病毒载量分析和监测,结合CD4+T淋巴细胞计数,有助于抗病毒药物治疗方案的确定和修改。

  ⑵ 监测疾病进展。定期检测HIV-1病毒载量,有助于监测感染者和病人的病程变化,结合CD4+T淋巴细胞计数,为抗病毒药物治疗提供病毒学依据。

  ⑶ 诊断急性HIV-1感染。针对HIV-1抗体筛查阴性、近期有流行病学史的个体,或确证结果不确定,核酸定量检测可用于诊断HIV-1急性期感染。

  ⑷ 确定HIV-1感染。针对HIV-1抗体筛查阳性或确证结果不确定的个体,结合流行病、和临床病史和CD4+T淋巴细胞计数等,使用核酸定量检测帮助确定HIV-1感染。

  三、HIV-1病毒载量检测方法及现状

  HIV-1病毒载量检测方法有多种原理,常用的包括核酸等温扩增、实时定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction PCR)、分支DNA技术、非核酸的酶法检测等,另外很多交叉学科也在HIV检测方面进行了试验型探索。目前国际上常用的病毒载量检测方法主要有分支DNA杂交(Branched DNA, bDNA)、核酸序列扩增(Nucleic Acid Sequence Based amplification, NASBA)方法及实时聚合酶链反应(Real time Polymerase chainreation, 实时-PCR)。分支DNA杂交(Branched DNA, bDNA)基于其独特的信号放大系统,即分枝DNA信号放大系统,这是一个人工合成的分枝DNA,分枝DNA的分枝可结合多个酶标记物,从而将病毒的信号放大,以便进行检测。NASBA技术是一种等温扩增系统,其扩增基础在于系统内的混合酶系统,此系统内含有逆转录酶AMV-RT和T7-DNA多聚酶在体外模拟逆转录病毒体内复制过程。实时荧光定量PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。这三种方法的原理、敏感性均不同,各有优势及不足。

  随着HIV载量应用的普及,检测技术的快速进步,目前HIV-1病毒载量检测技术总体上分为以下几个发展方向。

  第一,实时荧光检测技术成为主流,该技术由于成本低、操作简单、技术积累丰富等优点,在病毒载量检测中发挥越来越大的作用。目前国内厂家的病毒载量检测试剂均是基于实时PCR技术开发的,其他技术例如分支DNA技术已逐步退出载量检测领域。

  第二,检测设备趋向于一体化,或者是大型的全自动设备完成样本处理和检测,或者发展成小型的POCT (point-of-care testing, 现场快速检验)产品,而核酸等温扩增技术由于对反应条件要求很低,最有希望开发成POCT产品。第三,由于抗病毒药物的使用,多数HIV-1感染者血浆中的病毒会得到控制,表现为经典的病毒载量检测结果小于检测下限,此时为了更好地评价治疗效果,细胞基因组中整合的HIV成为研究热点,它的水平高低决定着患者预后。

  由于HIV有很高的遗传变异性,所以对于HIV核酸检测试剂来说,所用扩增引物的保守性和基因型覆盖能力,以及检测不同基因型样本的灵敏度,是评价此类产品的性能之一,也是困扰当今HIV诊断试剂向国际化发展的壁垒之一。目前国内已上市的HIV核酸检测试剂不多,仅有6种,这些试剂都是针对HIV-1型的主要基因型进行检测,对HIV-1型中的不常见基因型则很难检测出来,从而造成漏检以及各亚型定量不准确,而且灵敏度低,一般在1000 IU/ml左右,对于低值样本无法准确检测。国外性能优异的试剂有罗氏CAP-CTM-HIV-version-2.0试剂盒,灵敏度较高,但只能对HIV M组和O组样本进行检测,无法检测出HIV-N组样本,且试剂盒对样本需求量大,试剂和耗材价格比较昂贵,很难在医院广泛开展。因此研究开发艾滋病病毒新一代核酸检测试剂,对实现对艾滋病病毒早期、超敏诊断成功,全面提升我国艾滋病的诊、防、治水平起着至关重要的作用。

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  (来源:网易新闻)

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